Chemické složení nerezové oceli 347 Množství žilní nebo kapilární krve, specifické pro SARS-CoV-2, reakce T-buněk určuje imunitu vůči COVID-19.

Děkujeme, že jste navštívili Nature.com.Používáte verzi prohlížeče s omezenou podporou CSS.Chcete-li dosáhnout nejlepšího výsledku, doporučujeme použít aktualizovaný prohlížeč (nebo vypnout režim kompatibility v aplikaci Internet Explorer).Abychom zajistili trvalou podporu, zobrazujeme web bez stylů a JavaScriptu.
Posuvníky zobrazující tři články na snímku.Pro pohyb mezi snímky použijte tlačítka zpět a další, pro pohyb po jednotlivých snímcích použijte tlačítka posuvného ovladače na konci.

Chemické složení nerezové oceli 347

Chemické složení spirálové trubky z nerezové oceli 347

Chemické složení a mechanické vlastnosti spirálové trubky z nerezové oceli 347 jsou následující:
- Uhlík – max. 0,030 %
- Chrom - 17-19%
- Nikl - 8-10,5%
- Mangan – max. 1%

Mechanické vlastnosti spirálové trubky z nerezové oceli 347

Podle výrobce spirálových trubek z nerezové oceli 347, mechanické vlastnosti spirálových trubek 347:
- Pevnost v tahu (psi) – 75 000 min
- Mez kluzu (psi) – 30 000 min
- Tažnost (% ve 2″) – 25 % min
- Tvrdost podle Brinella (BHN) – 170 max

Aplikace a použití spirálové trubky z nerezové oceli 347

• Svitková trubka z nerezové oceli 347 používaná v cukrovarech.
• Trubka z nerezové oceli 347 použitá v hnojivu.
• Nerezová ocel 347 spirálová trubka používaná v průmyslu.
• Trubka z nerezové oceli 347 používaná v elektrárnách.
• Trubka z nerezové oceli 347 používaná v potravinářství a mlékárenství.
• Trubka z nerezové oceli 347 používaná v ropných a plynárenských závodech.
• Výrobce spirálových trubek z nerezové oceli 347 používaný v lodním průmyslu.

Předpokládá se, že T buňky specifické pro SARS-CoV-2 chrání před infekcí a progresí COVID-19, ale neexistují pro to žádné přímé důkazy.Zde jsme porovnávali měření plné krve T-buněk pozitivních na interferon-γ specifický pro SARS-CoV-2 s pozitivními výsledky diagnostických testů COVID-19 (PCR a/nebo laterální průtok) během 6 měsíců od odběru krve Lian.Mezi 148 účastníky, kteří darovali vzorky žilní krve, byla velikost odpovědi T-buněk specifických pro SARS-CoV-2 významně vyšší u těch, kteří zůstali chráněni, než u těch, kteří byli infikováni (P < 0,0001).% rizika infekce, zatímco vysoká intenzita toto riziko snížila na 5,4 %.Tyto výsledky byly zobecněny na dalších 299 účastníků, kteří testovali škálovatelný kapilární krevní test, který by mohl usnadnit přístup k údajům o imunitě T-buněk v populačním měřítku (14,9 % vs. 4,4 %).Měření T-buněk specifických pro SARS-CoV-2 tedy může předpovídat riziko infekce a mělo by být hodnoceno při monitorování imunitního stavu jedince a populace.
Měření a pochopení imunitní reakce na infekci SARS-CoV-2 je důležité pro vývoj účinných budoucích strategií k minimalizaci dopadů budoucích epidemií COVID-19 na veřejné zdraví a ekonomické dopady.Identifikace imunitních korelátů poskytne důležité informace o náchylnosti populace k virové infekci, případně včasné varování před vrcholnými hospitalizacemi a také umožní lidem osobně řídit riziko infekce a riziko nakažení ostatních.Imunitní dohled se ukázal jako zásadní pro hodnocení účinnosti vakcín COVID-19 u zdravých a vysoce rizikových pacientů1,2,3, zejména u mutantů SARS-CoV-24, a detekce imunokompromitovaných bude znamenat potřebu posílit imunitu Nechte se očkovat a předcházet budoucí ohniska.
Úroveň imunity jednotlivce vůči infekci SARS-CoV-2 závisí na mnoha faktorech: virová zátěž v době expozice, varianty viru, věk, předchozí vakcinace/stav infekce, komorbidity, léky, a co je nejdůležitější, infekce anti-SARS-CoV .2 adaptivní imunitní odpověď nastává v době expozice viru5.Hodnocení imunitní odpovědi na infekci SARS-CoV-2 a/nebo vakcinaci se zaměřilo na sérologické testy, které měří přítomnost protilátek specifických pro strukturální protein (např. spike glykoprotein).Samotná přítomnost nebo nepřítomnost protilátek však neurčuje přesně ochrannou imunitní odpověď, protože reakce jsou v průběhu času významně oslabeny6 a neutralizace variant SARS-CoV-2 u zotavujících se nebo dvakrát očkovaných jedinců Slabá aktivita, která by mohla vést k velkému počet průlomových infekcí7.Ochrana proti symptomatickému COVID-19 způsobenému variantou Omicron (B.1.1.529) se skutečně snížila na přibližně 10 % po pouhých 4–6 měsících vakcinace mRNA, ačkoli ochrana proti závažnému onemocnění přetrvávala >68 % po dobu alespoň 7 měsíců8.Měření odpovědí adaptivních paměťových T buněk, které poskytují dlouhodobou ochranu proti virové infekci, je nejlepším indikátorem náchylnosti k infekci SARS-CoV-2, a proto lepší indikací rizika pozitivního testování na COVID-199, protože specifické T buňky mohou zabránit infekci.bez sérokonverze10,11.Měření odpovědí T lymfocytů však věnovalo menší pozornost kvůli metodologickým obtížím a logistickým problémům při získávání a přepravě vzorků žilní krve, zejména při provádění velkých observačních studií pro hodnocení účinnosti vakcíny a monitorování imunity.Očkovaní jedinci však vykazují silnou aktivitu T buněk proti variantám SARS-CoV-2, což potenciálně kompenzuje ztrátu reaktivity protilátek, aby se omezila závažnost COVID-1912,13.
Zde jsme se snažili pochopit, zda jediné měření reakce T-buněk SARS-CoV-2 může předpovědět absolutní riziko infekce SARS-CoV-2 do 6 měsíců od odběru krve, bez ohledu na předchozí faktory ovlivňující imunitu.Aby byl test T buněk vysoce výkonný a mohl být použitelný pro větší studie, pokusili jsme se také o miniaturizaci testu, aby bylo možné jej provést pomocí kapilárního vzorku krve z prstu.
Měřili jsme buněčné a humorální imunitní odpovědi u zdravých dárců pomocí kombinované detekce SARS-CoV-2 T buněk a IgG protilátek na základě plné žilní krve (charakteristiky účastníků viz březen 2022 14. U očkovaných dárců SARS-CoV-2- specifické T-buněčné odpovědi byly stanoveny měřením hladin plazmatického interferonu-y (IFN-y) po stimulaci plné krve peptidem SARS-CoV-2 (jako dříve, odkazy 14,15,16,17,18) a souvisejících reakcí IgG s nukleokapsidem (N) byly zvýšeny u těch, kteří hlásili předchozí infekci, ačkoli obě reakce byly vyšší u dříve infikovaných neočkovaných dárců, maximální v těle (obr. 1a,b).Odpovědi IgG proti spike glykoproteinům (RBD, S1, S2) byly nejvyšší u dříve infikovaných očkovaných dárců (obrázek 1c–e).
reakce T-buněk IFN-γ+ specifické pro SARS-CoV-2 byly měřeny testem plné žilní krve a na základě očkování účastníků a předchozího stavu infekce SARS-CoV-2 (potvrzeno PCR a/nebo testem laterálního průtoku)' Vac + /Inf +' n = 60 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 82 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žlutá), 'Vac-/Inf-' n = 1 (neuplatněno).Vazebné reakce IgG specifické pro SARS-CoV-2 cílí na nukleokapsid (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), doménu vázající zvýrazněný receptor (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), vrcholová podjednotka 1 („S1“) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) a vrcholová podjednotka 2 (“S2”) (e) byla měřena testy plné žilní krve a na základě vakcinace účastníka a předchozího SARS-CoV-2 (potvrzeno pomocí PCR a/ nebo laterální průtokový test) infekční stav.'Vac + /Inf +' n = 60 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žlutá).Srovnání byla provedena pomocí Kruskal-Wallisova testu, upraveného pro vícenásobná srovnání pomocí Dunnova testu.Data jsou zobrazena jako grafy (střední čára na mediánu, horní hranice na 75. percentilu, spodní hranice na 25. percentilu) s vousy na minimální a maximální hodnotě.Každá tečka představuje dárce.Nezpracovaná data jsou poskytována ve formě souborů nezpracovaných dat.
Po odběru krve byli účastníci požádáni, aby sami nahlásili pozitivní výsledky PCR a/nebo laterálních průtokových testů na COVID-19;pokud byli účastníci mezi 1. zářím 2021 a 29. prosincem 2021 pozitivně testováni, mělo se za to, že byli infikováni koronavirem varianty Delta (B.1.617.2) a Omicron (B.1.1.529) pro Public Health Wales po 29. prosinci 2021, kdy tato možnost zájmu se stává dominantní.Mezi 148 hodnotitelnými dárci jsme pozorovali míru infekce 26,3 % (39/148) během 6 měsíců od darování krve, z nichž 38 dostalo druhou nebo třetí dávku vakcíny COVID-19 (průlom infekce nastal po Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA vakcína nebo vakcína AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));byl infikován i neočkovaný dárce.Velikost odpovědí T lymfocytů pozitivních na SARS-CoV-2 byla významně nižší u těch, kteří hlásili pozitivní diagnostický test na COVID-19, než u neinfikovaných dárců (P < 0,0001; obr. 2a), a to především kvůli optimální indukce odpovědí T buněk vakcinací u některých účastníků (P = 0,050; doplňkový obr. 1).Neexistovala žádná korelace mezi velikostí odpovědi IFN-y+ T buněk a časem do pozitivního výsledku testu COVID-19 (doplňkový obrázek 2).Naproti tomu ani reakce IgG vázající RBD, S1 a S2 (obrázky 2b–d), ani reakce neutralizujících RBD, S1 nebyly specifické pro SARS-CoV-2 divokého typu nebo delta (B.1.617).) (doplňkový obr. 3) dokáže rozlišit mezi lidmi ohroženými infekcí.Nízké N-vázané IgG odpovědi proti SARS-CoV-2 však korelovaly s rizikem infekce COVID-19 (P = 0,0084; obrázek 2e);u pozitivních testů byla pravděpodobnost o 85 % nižší (P = 0,00035; NEBO 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (doplňkový obrázek 4).
Vzorky žilní krve od zdravých dárců (n = 148) hodnotily odpovědi T-buněk IFN-γ+ specifické pro SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) a vazbu Spikeho receptoru na specifický SARS-CoV -2 podnět.doména („RBD“) (b), podjednotka špičky 1 („S1″) (c), podjednotka špičky 2 („S2″) (d) a nukleokapsid („N“) (e; **P = 0,0084 ) .Identifikováni účastníci, kteří byli pozitivně testováni na COVID-19 (PCR a/nebo laterální tok);všechny infekce se objevily do 6 měsíců od odběru krve.Srovnání byla provedena pomocí dvoustranného Mann-Whitneyho testu.Data jsou zobrazena jako grafy (střední čára na mediánu, horní hranice na 75. percentilu, spodní hranice na 25. percentilu) s vousy na minimální a maximální hodnotě.Každá tečka představuje dárce.ns není důležité.Teplotní mapa f ukazuje Spearmanovy korelace pořadí mezi proměnnými pro zadanou datovou sadu.Srovnání, která nebyla statisticky významná, byla z matrice vyloučena a označena prázdnými buňkami.Nezpracovaná data jsou poskytována ve formě souborů nezpracovaných dat.
Přednastavený diagnostický pozitivní limit 14 byl považován za příliš svévolný pro posouzení rizika opětovné infekce, takže byla stanovena mezikvartilní rozmezí pro stanovení parametrů absolutního rizika.Statistický model, který zahrnoval pouze proměnné, které měly významný vliv na výsledky, ukázal, že velikost odpovědi T-buněk IFN-γ+ specifických na SARS-CoV-2 byla nejdůležitějším imunitním biomarkerem pro stanovení šancí jednotlivce být testován na COVID.-19 pozitivních (obrázek 2f a doplňkový obrázek 4).Pacienti se SARS-CoV-2 specifickou odpovědí IFN-γ+ T buněk ve třetím (194-489 pg/ml IFN-γ) a čtvrtém (>489 pg/ml IFN-γ) kvartilu 65 % (P = 0,055; OR 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) a 90 % (P = 0,0050; OR 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) mělo více účastníků.Šance jsou malé (doplňkový obr. 4).Celkově měli účastníci s odpovědí T buněk specifickou na SARS-CoV-2 z venózní krve ≤ 79 pg/ml IFN-γ 43,2% riziko průlomové infekce po 6 měsících ve srovnání s odpovědí > 489 pg/ml.ml IFN-γ mělo riziko infekce 5,4 % (tabulka 2).
Rozsah vyšetření plné žilní krve je omezený kvůli nutnosti odběru vzorku flebotomem.Aby se zvýšila dostupnost testování T buněk a IgG na SARS-CoV-2, byla vyvinuta alternativní metoda odběru kapilární krve, která účastníkům umožní získat vzorky krve z prstu doma.Pokud je nám známo, nebyly k dispozici žádné předchozí zprávy o měření funkce antigen-specifických T buněk ve vzorcích kapilární krve.Již dříve byla prokázána silná korelace mezi počty lymfocytů získanými pomocí srovnatelných vzorků kapilární a venózní krve.Kromě toho bylo hlášeno, že testy založené na plné krvi měřící odpovědi T-buněk specifické pro SARS-CoV-2 používají pouze 320 μl žilní krve,20 což eliminuje obavy z frekvence progenitorových T-buněk ve vzorcích kapilární krve.
Tento vysoce výkonný standardizovaný kolaborativní test SARS-CoV-2 T buněk a IgG protilátek na bázi kapilární plné krve jsme použili k měření buněčné a humorální imunitní odpovědi u účastníků s různými komorbiditami a předchozím stavem očkování/infekce (tabulka 1).rekrutováni z celého Spojeného království mezi 24. lednem a 14. březnem 202214. Většina (90,9 %) vzorků prstů byla správně odebrána a odeslána do laboratoře do 24 hodin od odběru.V některých případech byly vzorky přijaty do 48 hodin po odběru krve, ale žádný z těchto vzorků neprošel kontrolami kvality a neovlivnil celkové měření T buněk nebo protilátek (doplňkový obr. 5).I když u některých jedinců existovaly rozdíly ve velikosti odpovědi IFN-γ+ T-buněk specifické pro SARS-CoV-2 naměřené v příslušných vzorcích kapilární a venózní krve, celkově nebyly žádné významné rozdíly (P = 0,88; Doplňkový obr. 6 ).).
SARS-CoV-2-specifické IFN-y+ T buněčné reakce byly významně zvýšeny u očkovaných jedinců, kteří také hlásili předchozí infekci (P = 0,0001), ale ne významně vyšší než u dříve infikovaných neočkovaných dárců (P = 0,19, obr. 3a).).Odpovědi IgG proti spike glykoproteinu (RBD, S1, S2) byly významně vyšší u očkovaných dárců než u neočkovaných dárců, bez ohledu na stav předchozí infekce (obrázek 3b-d).Je zajímavé, že průměrná N-vázaná IgG odpověď byla nejvyšší u dříve infikovaných neočkovaných účastníků ve srovnání s očkovanými účastníky, i když to nedosáhlo významnosti (obrázek 3e).Mezi neočkovanými a neinfikovanými dárci, kteří se sami prohlásili, bylo 15 z 37 (40,5 %) účastníků pozitivních na N-vázaný IgG, nad dříve stanovenou prahovou hodnotou 2,0 BAU/ml14;těchto 15 účastníků Dvanáct z těchto pacientů bylo pozitivně testováno na IFN-y+ T buněčnou odpověď nad dříve stanoveným prahem 22,7 pg/ml IFN-y14.Proto je pravděpodobné, že tito účastníci byli dříve infikováni SARS-CoV-2 a nebyli testováni na COVID-19 kvůli osobní volbě, nedostatku PCR a/nebo zařízení pro laterální průtok nebo byli asymptomatičtí.Ačkoli existovala významná korelace mezi odpověďmi T buněk na IFN-γ+ a N-vázanými hladinami IgG u neočkovaných dárců (P = 0,0044; doplňkový obrázek, N-vázaná IgG odpověď klesala rychleji než N-vázaná IgG odpověď, zatímco IFN-y + Reakce T buněk byly zachovány bez ohledu na stav vakcinace, ačkoli počet dárců 50 týdnů po provokaci byl nízký (doplňkový obrázek 8). Typ vakcinace se obecně málo lišil v pozorovaných odpovědích IgG specifických pro SARS-CoV-2, T buňky a související s RBD, ačkoli účastníci, kteří dostali dvě dávky BNT162b2 následované revakcinací mRNA1273, vykázali významně vyšší hladiny IFN-γ + T buňky byly citlivější na SARS-CoV-2 než ti, kteří dostali dvě dávky ChAdOx1 a BNT162b2 (doplněk Obr. 9) Navíc hlášené komorbidity měly malý celkový rozdíl v pozorovaných T buněčných odpovědích ve srovnání se zdravými dárci (doplňkový obr. 10).
reakce T-buněk IFN-γ+ specifické pro SARS-CoV-2 byly měřeny kapilárním testem plné krve a byly založeny na očkování účastníků a předchozím infekčním stavu SARS-CoV-2 (potvrzeno PCR a/nebo testem laterálního průtoku).'Vac + /Inf +' n = 42 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 158 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 33 (žlutá), 'Vac- /Inf-' n = 37 (šedá).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2 specifické vazebné reakce IgG na spike receptor binding domain (“RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: nevýznamné), spike podjednotka 1 (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: nevýznamné), vrcholová podjednotka 2 („S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) a nukleokapsid („N“) (e; ****P < 0,0001, ns nevýznamné) byly měřeny pomocí analýzy plné žilní krve a na základě očkování účastníků a předchozího SARS-CoV-2 (potvrzeno pomocí PCR a/nebo analýzy laterálního průtoku) Infekce byly rozděleny podle postavení.'Vac + /Inf +' n = 46 (zelená), 'Vac + /Inf-' n = 182 (modrá), 'Vac-/Inf +' n = 34 (žlutá), 'Vac-/Inf-' n = 37 (šedá).Srovnání byla provedena pomocí Kruskal-Wallisova testu, upraveného pro vícenásobná srovnání pomocí Dunnova testu.Data jsou zobrazena jako grafy (střední čára na mediánu, horní hranice na 75. percentilu, spodní hranice na 25. percentilu) s vousy na minimální a maximální hodnotě.Každá tečka představuje dárce.Nezpracovaná data jsou poskytována ve formě souborů nezpracovaných dat.
Stejně jako dříve byli účastníci požádáni, aby nahlásili pozitivní výsledky PCR a/nebo laterálního průtoku krve pro COVID-19;podle britské zdravotnické agentury se u účastníků předpokládalo, že byli infikováni koronavirem Omicron (B.1.1.529) v době testování pozitivní varianty viru, protože se jednalo o dominantní variantu ve Spojeném království během období studie.Mezi 299 hodnotitelnými dárci jsme pozorovali míru infekce 8,0 % (24/299) do tří měsíců od dárcovství kapilár, z nichž sedm nebylo očkováno.Podíl komorbidit mezi všemi účastníky byl nižší u těch, kteří byli pozitivně testováni na COVID-19 (10,7 %) než u těch, kteří byli testováni na COVID-19 negativně (24,4 %, tabulka 1), což může být způsobeno tím, že účastníci s určitým nemoci jsou opatrnější a chrání před potenciálními následky, jako je cukrovka a rakovina.Jak bylo pozorováno u kohorty žilní krve, SARS-CoV-2-specifické T buňky pozitivní na interferon-γ (IFN-γ) měřené ve vzorcích kapilární krve od jedinců vykazujících pozitivní diagnostický test na COVID-19.Velikost odpovědi byla významně nižší než u neinfikovaných dárců (P = 0,034; obrázek 4a) v důsledku relativně slabé indukce reakce T buněk vakcinací a/nebo předchozí infekcí (doplňkový obrázek 11).Podobně ani odpovědi IgG vázající RBD, S1, S2 (obrázky 4b–d) ani odpovědi neutralizujících RBD, S1 nebyly specifické pro SARS-CoV-2 divokého typu nebo delta (B. 1.617).(Doplňkový obrázek 12).Lze identifikovat jedince s jakýmkoli významným rizikem infekce.Na rozdíl od žilní kohorty, N-související IgG reakce také nerozlišují riziko COVID-19 (obrázek 4e), což naznačuje, že varianta Omicron (B.1.1.529) zvyšuje imunitní únik u dříve infikovaných jedinců, jak bylo nedávno popsáno 21. Naproti tomu síla reakce T-buněk IFN-y specifické pro SARS-CoV-2 byla opět nejdůležitější proměnnou při určování individuálních šancí na pozitivní testování na COVID-19 (obrázek 4f).Celkově měli účastníci s kapilární T-buněčnou odpovědí specifickou pro SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/ml IFN-γ 14,9% riziko infekce po třech měsících ve srovnání s odpovědí >141,6 pg/ml.ml IFN.-γ měl riziko infekce 4,4 % (tabulka 2).
IFN-γ+ T-buněčné odpovědi specifické pro SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) a SARS-CoV-2 specifickou pro IgG-cílenou receptor-vazebnou doménu („RBD“) (b), spike podjednotka 1 (' Sl') (c), spike podjednotka 2 ('S2') (d) a nukleokapsidová vazebná reakce ('N') (e).Účastníci identifikovaní jako pozitivní na testy COVID-19 (PCR a/nebo test laterálního průtoku krve), ke všem infekcím došlo do 3 měsíců od odběru krve.Srovnání byla provedena pomocí dvoustranného Mann-Whitneyho testu.Data jsou zobrazena jako grafy (střední čára na mediánu, horní hranice na 75. percentilu, spodní hranice na 25. percentilu) s vousy na minimální a maximální hodnotě.Každá tečka představuje dárce.ns není důležité.Teplotní mapa f ukazuje Spearmanovy korelace pořadí mezi proměnnými pro zadanou datovou sadu.Srovnání, která nebyla statisticky významná, byla z matrice vyloučena a označena prázdnými buňkami.Nezpracovaná data jsou poskytována ve formě souborů nezpracovaných dat.
S přechodem do další fáze pandemie COVID-19 se pozornost přesune z prevence na individuální řízení rizik a identifikaci zranitelných členů společnosti.Stanovení korelací imunity vůči COVID-19 je zásadní pro účinnou identifikaci a léčbu těchto vysoce rizikových skupin.Nyní přibývá důkazů, že T-buněčná imunita chrání před infekcí SARS-CoV-2 a omezuje závažnost COVID-1910.Zde prezentovaná data ukazují, že kombinovaná síla odpovědí IFN-γ+ T buněk specifických pro SARS-CoV-2 proti spike, membránovým a nukleokapsidovým strukturálním proteinům poskytuje větší ochranu proti COVID-19 než vazba protilátky.19 podporuje nebo neutralizuje odpovědi .a měla by být zohledněna při posuzování individuální a/nebo stádní imunity.RNA viry, jako je SARS-CoV-2 nebo virus chřipky A (IAV) se vyhýbají sérologické neutralizaci rychle se vyvíjejícími exponovanými B-buněčnými epitopy na povrchových antigenech rozpoznávaných protilátkami.Ochranná imunitní reakce poskytovaná T buňkami může odrážet zacílení epitopů z více konzervovaných oblastí virových proteinů, které nemohou rychle uniknout imunitní reakci.Ochrana zprostředkovaná T buňkami proti novým variantám SARS-CoV-2 je podobná heterosubtypové ochraně zprostředkované cílením T lymfocytů na konzervované vnitřní proteiny pozorované u subtypů IAV22,23.
Navzdory obrovskému potenciálu pro měření buněčné imunitní odpovědi na COVID-19 byla věnována relativně malá pozornost vývoji přesných, vysoce výkonných standardizovaných testů T-buněk.Tradiční složitosti a náklady spojené s měřením odpovědí T buněk znemožňují přesné stanovení imunity T buněk při screeningu imunity velké populace.I když bylo nedávno k dispozici několik komerčních testů stimulace peptidů v plné krvi, každý v současné době potřebuje k získání krve flebotoma, což omezuje dostupnost a rozsah.Systémy kapilární krve se široce používají ke stanovení prevalence protilátek proti SARS-CoV-2 v populaci.Upravili jsme kapilární krevní testy k provádění testů stimulace peptidů v plné krvi, abychom vyhodnotili reaktivitu T buněk na strukturální proteiny SARS-CoV-2 a specifické protilátkové odpovědi SARS-CoV-2.Kombinované měření SARS-CoV-2-specifických protilátek a T buněk ve stejném vzorku kapilární krve je ve skutečnosti velmi atraktivní: (i) snižuje potřebu více krevních testů na účastníka, (ii) zlepšuje zkušenost účastníka a porozumění;(iii) zlepšit logistiku a omezit duplicitu, (iv) snížit dopad na životní prostředí, protože je potřeba méně laboratorního spotřebního materiálu a dodávek vzorků.Přestože celková reaktivita IFN-γ byla podobná mezi odpovídajícími vzorky žilní a kapilární krve, bylo pozorováno, že byla nižší v kohortě z kapilární krve účastníků (obr. 4a) ve srovnání s kohortou žilní krve (obr. 2a).Hodnoty IFN-γ ​​Pro toto zjištění existuje několik vysvětlení, konkrétně velký počet účastníků s komorbiditami vyžadujícími imunosupresivní léčbu byl přijat do kohorty odběru kapilární krve (Tabulka 1) a životaschopnost a/nebo funkce T buněk získaných z vaskulárních vzorky mohou být nízké, zejména s přihlédnutím k podmínkám dlouhodobého skladování vzorků před stimulací peptidem.
V současnosti široce dostupná vakcína proti COVID-19 poskytuje většině příjemců nejlepší ochranu před závažným onemocněním do 6 měsíců po očkování8.Povzbudivé je, že navzdory slabé vakcínou vyvolané sérologické neutralizaci variant SARS-CoV-26,7 zůstaly reakce T-buněk vyvolané očkováním proti divokému typu SARS-CoV-2 vysoce reaktivní, protože se objevilo 25 dalších.Údaje, které zde uvádíme, prokazují důležitost širšího hodnocení imunogenicity vakcíny, zdůrazňujíc vakcíny s nedostatečnou imunitou T-buněk, aby se zabránilo náhlé infekci a trvalému přenosu viru.Také jsme pozorovali, že mnoho neočkovaných jedinců rekrutovaných do kapilární kohorty mělo významnou odpověď na SARS-CoV-2-specifické T buňky (a N-vazebné IgG) bez ohledu na předchozí očkování, což je pravděpodobně způsobeno předchozí infekcí.Spíše než očkovat vhodné jedince by mělo být jejich riziko infekce posouzeno na základě jejich aktuálního stavu imunizace a informovaných rozhodnutí.
Mezi omezení této studie patří ujištění, že účastníci sami nahlásili infekci SARS-CoV-2 po odběru krve, aby určili význam imunity;někteří účastníci mohou mít asymptomatickou infekci a nejsou schopni podstoupit PCR a/nebo laterální průtokový test na COVID-19.V našem souboru dat také chyběly informace o lécích účastníků v době odběru krve.Kromě toho, vzhledem k tomu, že všichni naši účastníci hlásili pouze mírné/střední příznaky nebo žádné příznaky, nebylo možné z našeho souboru dat identifikovat imunitní reakce, které by předpovídaly zvýšené riziko závažných onemocnění a hospitalizace pro COVID-19.Přítomnost odpovědí CD8+ T buněk proti epitopům specifickým pro nukleokapsidy však byla nedávno spojena s ochranou proti závažnému COVID-1926.Kromě toho zde použitý test neměřil reakce T buněk na specifické časně exprimované nestrukturální proteiny SARS-CoV-2, u kterých se nedávno ukázalo, že se přednostně akumulují u séronegativních zdravotnických pracovníků, kteří byli v kontaktu s infikovanými pacienty.Na základě této práce, vzhledem k prevalenci komunitního přenosu v době náboru a vysoké pravděpodobnosti kontaktní infekce v populaci, se počet T buněk specifických pro SARS-CoV-2 nalezených v našich testech také zdá být schopen clearance.subklinické infekce v našich kohortách.Nakonec jsme neměřili produkci interleukinu 2 T buňkami, protože naše předchozí práce prokázala špatnou identifikaci odpovědí T-buněk specifických pro SARS-CoV-214, i když odpovědi specifické pro IL-2 mohou naznačovat již existující zkříženou reaktivitu.buňky spojené s obranou proti infekci SARS-CoV-211.
Celkově vzato, tato data zdůrazňují zásadní potřebu dlouhodobých longitudinálních studií, které začleňují odpovědi T-buněk specifické pro SARS-CoV-2 do měření imunity v populačním měřítku.Tomuto úsilí může pomoci vývoj nového kapilárního krevního testu, který měří odpověď T-buněk.
Výzkumný projekt rekrutoval účastníky od února 2021 do března 2022. Kohortu zdravých dárců (n = 148), kteří darovali vzorky žilní krve, tvořili především univerzitní zaměstnanci a studenti účastnící se screeningové služby COVID-19 na Cardiffské univerzitě nebo zaměstnanci základní školy v Cardiff.Všichni účastníci byli jinak zdraví a neuváděli užívání žádných imunosupresivních léků (charakteristiky viz tabulka 1).Skupina účastníků, kteří darovali vzorky kapilární krve, zahrnovala všechny dobrovolné dárce (ve věku 18+) z celé Velké Británie.Mezi 24. lednem a 14. březnem 2022 bylo do studie zařazeno 342 účastníků, z nichž 299 odevzdalo vzorky krve do laboratoře.Mnoho účastníků zůstalo neočkovaných a/nebo hlásilo závažné komorbidity, včetně autoimunitních onemocnění a rakoviny (charakteristiky viz Tabulka 1).Tato studie získala etické schválení od Etického výboru pro výzkum Newcastle a North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) a Etického výboru pro výzkum Lékařské fakulty Univerzity v Cardiffu (ref. SREC: SMREC 21/01).Všichni účastníci dali před zařazením písemný informovaný souhlas.Účastníci neobdrželi žádnou odměnu za účast v této studii.
Vzorky žilní krve byly získány venepunkcí do 6 nebo 10 ml lithiových nebo sodných heparinových vakuových nádob (BD).Vzorky kapilární krve byly získány prstovou lancetou a poté odebrány do heparinových mikronádobek (BD).Je vyžadováno minimálně 400 µl krve;jakýkoli vzorek menší než toto množství bude zamítnut.Další důvody pro odmítnutí vzorku zahrnovaly masivní koagulaci a/nebo hemolýzu a selhání při odběru viskózní plazmy pro analýzu (doplňkový obr. 5).Pro hodnocení protilátkových odpovědí bylo k dispozici celkem 299 vzorků kapilární krve, z toho 270 vzorků bylo k dispozici také pro hodnocení T buněčných odpovědí.
Reakce T-buněk specifické pro SARS-CoV-2 byly hodnoceny pomocí testu COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) a prováděny, jak bylo popsáno dříve14.Stručně řečeno, jeden 6 ml nebo 10 ml heparin sodný (BD) venózní vakutainer byl odebrán každému účastníkovi a zpracován v laboratoři do 12 hodin po odběru krve.Přestože většina vzorků byla zpracována do 24 hodin, jedna 400–600 μl heparinizované mikrobleedingové (BD) kapilární krve byla odebrána do 48 hodin od odběru z prstu.Vzorky žilní a/nebo kapilární krve byly stimulovány samostatnými peptidovými pooly specifickými pro SARS-CoV-2 (varianta divokého typu), jak bylo popsáno dříve14.Tato peptidová knihovna obsahuje 420 15merových sekvencí s 11 překrývajícími se aminokyselinami zahrnujícími celý spike protein (S1 a S2) (S; NCBI protein: QHD43416 1), nukleokapsidový fosfoprotein (NP; NCBI protein: QHD43423 2) a membránový glykoprotein (M NCBI protein: QHD43419 1) kódující sekvence (označované jako "S-/NP-/M-kombinatorní peptidová knihovna").Všechny peptidy byly purifikovány na >70 %, rozpuštěny ve sterilní vodě a použity v konečné koncentraci 0,5 ug/ml na peptid.Vzorky byly inkubovány při 37 °C po dobu 20-24 hodin.Zkumavky byly poté centrifugovány při 5000 x g po dobu 3 minut a -150 ul plazmy bylo odebráno z horní části každého vzorku krve.Před provedením testů detekce cytokinů/protilátek skladujte vzorky plazmy při -20 °C po dobu až jednoho měsíce.
IFN-y byl měřen pomocí IFN-y ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, katalogové číslo 430116) a prováděn podle pokynů výrobce.Ihned po přidání zastavovacího roztoku (2N H2S04) byla mikrodestička odečtena při 450 nm pomocí BioLegend Mini ELISA plate reader.IFN-y byl kvantifikován extrapolací standardní křivky pomocí GraphPad Prism.Hodnoty pod dolním detekčním limitem testu byly zaznamenány jako 7,8 pg/ml, hodnoty nad horním limitem detekce testu byly zaznamenány jako 1000 pg/ml.
Protilátky IgG proti SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N byly měřeny pomocí Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex panelu (Bio-Rad, kat. č. 12014634) a označeny podle pokyny výrobce.instrukce .Vzorky vykazující hodnoty nad limitem kvantifikace byly znovu analyzovány při ředění 1:1000.Průměrná intenzita fluorescence kuliček byla měřena na přístroji Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Koncentrace protilátek byly vypočteny jednoduchým kontrolním testem VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) a převedeny na WHO/NIBSC 20/136 mezinárodních referenčních standardních jednotek (BAU/ml) s použitím kalibračního faktoru výrobce.
Neutralizační protilátky specifické pro podjednotku RBD a S1 proti SARS-CoV-2 divokého typu a delta (B.1.617) liniím SARS-CoV-2 byly měřeny pomocí Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad , obj. č. 12016897), podle pokynů výrobce.Změřte průměrnou intenzitu fluorescence na Bio-Plex 200 (Bio-Rad) a vypočítejte procento inhibice (tj. neutralizace) pomocí následujícího vzorce:
Infekční neutralizační testy na SARS-CoV-2 byly provedeny, jak bylo popsáno dříve28.Stručně, 600 PFU divokého typu SARS-CoV-2 bylo inkubováno s trojnásobným sériovým ředěním plazmy v duplikátech po dobu 1 hodiny při 37 °C.Směs byla poté přidána k buňkám VeroE6 po dobu 48 hodin.Monovrstvy byly fixovány 4% paraformaldehydem, permeabilizovány 0,5% NP-40 a inkubovány po dobu 1 hodiny v blokovacím pufru (PBS obsahující 0,1% tween a 3% odstředěné mléko).Primární protilátka (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) byla přidána do blokovacího pufru na 1 hodinu při teplotě místnosti.Po promytí byla sekundární protilátka (anti-myší IgG-HRP, Pierce) přidána do blokovacího pufru na 1 hodinu.Monovrstvy byly promyty, vyvinuty pomocí Sigmafast OPD a odečteny na čtečce destiček Clariostar Omega.Jamky bez viru, bez viru, ale bez protilátek a normalizovaná séra vykazující střední aktivitu byly zahrnuty do každého experimentu jako kontroly.
Statistická analýza byla provedena v GraphPad Prism (verze 9.4.1).Normalita souboru dat byla testována pomocí Shapiro-Wilkova testu.Pro všechna srovnání byla použita neparametrická kritéria.Pro nepárové vzorky byl použit Mann-Whitney test.Všechny testy byly oboustranné s nominálním prahem významnosti P ≤ 0,05.
Počáteční průzkumná analýza souboru dat byla provedena v R (verze 4.0.3).To zahrnuje vývoj Spearmanovy jednorozměrné korelační matice pořadí, kde korelace mezi dvěma proměnnými je reprezentována velikostí a barvou čtverců.Statistická významnost mezi asociacemi byla vypočtena pomocí Spearmanova rho, kde hodnoty ≤0,05 byly považovány za významné.Srovnání, která nebyla statisticky významná, byla z matrice vyloučena a označena prázdnými buňkami.P-hodnoty byly upraveny pro vícenásobná srovnání pomocí Holmovy korekce.K simulaci vlivu proměnných v souboru dat na pozitivní reakci na COVID-19 byl použit binární logistický regresní model.Odpovědi IFN-y T buněk a skóre anti-RBD/S1/S2/N IgG titru byly převedeny na faktory, kde každý jedinec byl přiřazen do příslušného kvartilu pro každé skóre.Poté byl vyvinut počáteční model výzkumu pomocí funkce glm ve statistickém balíčku (V4.0.3).Poměry šancí odvozené z tohoto původního modelu byly extrahovány z koeficientů modelu pomocí funkce 'odds_plot' v balíčku OddsPlotty (V1.0.2).Při vývoji modelu křížové validace jsme použili funkci „bestglm“ z balíčku bestglm (V0.37.3), abychom omezili zkreslení uživatelů a zajistili, že bude možné vybrat nejlepší podmnožinu prediktorů.Zvolená metoda byla „vyčerpávající“ a informačním kritériem pro posouzení vhodnosti modelu bylo AIC.Stejný pracovní postup popsaný výše byl použit k získání poměru šancí.
Další informace o designu studie najdete v abstraktu studie Nature, který je připojen k tomuto článku.
Dopisy a žádosti o materiály by měly být směrovány na Dr. Martina Scarra nebo profesora Andrewa Godkina.Tento článek poskytuje původní data.
R kód používaný k vytváření statistických modelů je veřejně dostupný bez vyžádání29.Informace o opětovném tisku a licence lze nalézt na adrese www.nature.com/reprints.
Munro, APS a kol.Bezpečnost a imunogenicita sedmi vakcín COVID-19 jako třetí dávka (booster) po dvou dávkách ChAdOx1 nCov-19 nebo BNT162b2 (COV-BOOST) ve Spojeném království: zaslepená, multicentrická, randomizovaná, kontrolovaná studie fáze 2.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV a kol.Imunogenicita, bezpečnost a reaktogenita heterologní primární vakcinace proti COVID-19 (Com-COV2) s použitím mRNA, virových vektorů a proteinových adjuvantních vakcín ve Spojeném království: fáze 2, jednoduše zaslepená, randomizovaná studie, test non-inferiority.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB a kol.Účinnost vakcín proti COVID-19 u imunokompromitovaných pacientů: Systematický přehled a metaanalýza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. a kol.Snížená neutralizace SARS-CoV-2 mikronové varianty B.1.1.529 sérem po imunizaci.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y a Baliser RD Průlomová infekce u jedinců očkovaných SARS-CoV-2: měření, příčiny a důsledky.Národní kněz imunologie.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG a kol.Oslabená imunitní humorální odpověď na vakcínu BNT162b2 Covid-19 po dobu 6 měsíců.N. eng.J. Medicína.385, e84 (2021).
Carreño, JM a kol.Aktivita rekonvalescentních a vakcinačních sér proti SARS-CoV-2 Omicron.Příroda 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. a kol.Délka ochrany katarské mRNA vakcíny proti SARS-CoV-2 Omicron BA.1 a BA.2 subvarianty.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ a kol.Frekvence paměťových B buněk klesá s průlomovou infekcí vakcíny COVID-19 delta.Molekulární medicína EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. a kol.Zkříženě reaktivní paměťové T buňky jsou spojeny s ochranou kontaktů COVID-19 před infekcí SARS-CoV-2.Národní komuna.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH a kol.Charakteristické reakce T lymfocytů a B lymfocytů na SARS CoV-2 reagující na omikrony u příjemců vakcíny COVID-19.věda.Imunologie.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu a kol.Zděděné T buňky specifické pro SARS-CoV-2 křížově rozpoznávají varianty Omicron.Národní medicína.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ a kol.Měření SARS-CoV-2-specifických T buněk z plné krve odhaluje asymptomatickou infekci a imunogenicitu vakcíny u zdravých jedinců a pacientů s rakovinou solidních orgánů Immunology https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT a kol.Rychlé měření SARS-CoV-2 spike T buněk v plné krvi očkovaných a přirozeně infikovaných jedinců.J. Clinical.investovat.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU a kol.Reakce na vakcínu COVID-19 u pacientů s roztroušenou sklerózou.Nainstalujte.Neurony.91, 89–100 (2022).
Bradley RE a kol.Přetrvávající infekce COVID-19 Wiskott-Aldrichovým syndromem zmizela po terapeutickém očkování: kazuistika.J. Clinical.Imunologie.42, 32–35 (2022).